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Purification engineering technology research center of Sichuan Province Natural Medicine
四川省天然藥物分離純化工程技術(shù)研究中心

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對照品使用中的常見問題及解決方案(一) ——對照品純度異常

本文來自:    發(fā)布時間:2025-06-05

在高效液相色譜檢測中,對照品純度直接影響定量分析的準確性,在售后工作中經(jīng)常遇見因?qū)φ掌芳兌犬惓е聰?shù)據(jù)偏差的案例?,F(xiàn)從專業(yè)角度剖析原因及應(yīng)對策略:

1,檢測波長選擇差異

原因:雜質(zhì)峰與對照品峰有不同的紫外吸收特征,在不同波長下呈現(xiàn)不同的色譜圖。
解決方案:選擇對照品與雜質(zhì)具有相似吸收特征的波長,純度結(jié)果會更趨近真實值(如示圖選擇255nm檢測)。


2,空白干擾
原因:部分溶劑在特定波長下有紫外吸收,特別是末端波長下?;蛉軇┍晃廴疽矔霈F(xiàn)一些雜峰,導致對照品檢測純度不夠。
解決方案:檢測對照品時用相同色譜方法檢測空白溶劑,扣除空白溶劑中的峰即可排除空白干擾。



3,對照品溶液不穩(wěn)定
原因:部分對照品固體狀態(tài)時穩(wěn)定,但是溶解后卻容易降解(如在溶液中存在互變異構(gòu)或發(fā)生水解等化學反應(yīng))。
解決方案:找到不穩(wěn)定的原因,并隔絕不穩(wěn)定因素(如現(xiàn)配現(xiàn)測,或更換適宜的溶劑。)



4,溶解性影響
原因:部分對照品在當前溶劑下溶解性較差,在溶解時對照品或其雜質(zhì)溶解不充分,從而導致純度異常。
解決方案:更換溶解性更好的溶劑、降低配制濃度或添加助溶劑(DMSO或DMF)。
5,樣品污染
原因:對照品可能在保存期間、運輸期間、取樣期間、甚至上機檢測期間被不干凈的器具、器皿、溶劑等污染,導致純度不夠。
解決方案:盡量避免各個環(huán)節(jié)污染,如使用干凈的器皿、新開封的溶劑,且檢測前確保色譜柱、儀器系統(tǒng)已經(jīng)完全被沖洗干凈(可先進空白溶劑以確證)。
6,色譜柱問題
原因:色譜柱柱效下降或色譜柱不適用
解決方案:測試柱效,查看柱效參數(shù)是否符合要求。如為柱效下降則更換新的色譜柱;如為色譜柱不適用,可選擇具更高選擇性的色譜柱,如HILIC、手性柱等。



7,溶劑效應(yīng)
原因:對照品溶劑強度大于流動相強度,可造成的色譜峰變形、分叉或出現(xiàn)異常峰。
解決方案:使用與流動相初始比例極性相當?shù)娜軇┤芙鈱φ掌?、或降低進樣量。



8,樣品過載
原因:對照品濃度配制過高,超過色譜柱的載樣量,也可能使檢測器響應(yīng)過載,導致純度結(jié)果異常。
解決方案:降低對照品濃度。
9,對照品發(fā)生降解
原因:對照品存儲條件不當,如光照、溫度、濕度或密封性等不適宜會導致降解。
解決方案:使用惰性氣體保護,密封包裝,避光保存于-20℃或2-8℃環(huán)境(視化合物性質(zhì)而定)。對使用者而言,收到對照品的第一時間按產(chǎn)品說明書保存對照品。
10,基線噪音過大
原因:當基線噪音過大時,易將溶劑峰、系統(tǒng)峰錯誤積分計入雜質(zhì)。
解決方案:排除儀器系統(tǒng)干擾和流動相的影響,如檢查檢測器氘燈能量、流通池污染或氣泡、泵污染或泵穩(wěn)定性、溫度穩(wěn)定性、流動相氣泡或均勻性等。
11,洗脫程序不適用
原因:某些極性非常相近的雜質(zhì)在色譜條件下未分離,如異構(gòu)體雜質(zhì)。
解決方案:優(yōu)化洗脫程序(如改為梯度洗脫、延長洗脫時間、調(diào)整有機相比例等)。
12,檢測器不適用
原因:化合物因其不同的結(jié)構(gòu)特征,具有不同紫外特征吸收,也適宜不同的檢測器(或檢測波長),因而可能出現(xiàn)不出峰、峰面積偏低、純度偏低等情況。
解決方案:選擇適宜的檢測器,如沒有紫外吸收的化合物可以選擇蒸發(fā)光檢測器或者示差折光檢測器,或選擇適宜的檢測波長(參考第一條)。



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